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  • 过滤完盐酸万古霉素后,微生物仍可正常生长---赛多利斯实验室

    [2019/4/10]

    过滤完盐酸万古霉素后,微生物仍可正常生长---赛多利斯实验室

     

    开展以下试验是用于证明Sterisart®系统在过滤完盐酸万古霉素后,仍可以让微生物在其中正常生长。

     

    试验背景

    在没有抑制剂的情况下,微生物可以快速增殖??赡艽嬖谟谖蘧觳庖┢费分械娜魏畏栏粱蚩股夭辛粑锒急匦朐谂嘌尤胂低持氨怀逑慈コ?。由于万古霉素不能被中和,所有与样品接触的部件必须为低吸附,且所采用的设计形式必须保证能够实现彻底冲洗从而去

    除所有残留。

    试验描述

    Sterisart® 系统经无菌生理盐水润湿后,对盐酸万古霉素溶液进行过滤。在完成冲洗步骤之后,根据欧洲药典要求,将胰酪大豆胨液体培养基加入Sterisart® 系统的一个容器内。向这个容器内接种50-100CFU微生物,进行微生物培养,最多培养3天。取出另一个容器中的滤膜,进行抑制试验。

     

    材料和设备

    抗生素盐酸万古霉素 

    检测菌株 

    枯草芽孢杆菌 

    金黄色葡萄球菌 

    胰酪大豆胨液体培养基Oxoid;

    NaCl

    Merck

    Sterisart®通用型无菌检测泵,

    Sterisart®通用型无菌检测泵

    Sterisart® 装置

    Sterisart® NF,

    Sterisart® NF适配器

    检测准备

    无菌生理盐水

    为制备0.9%的无菌生理盐水溶液,先将9g固体NaCl溶解于1L去离子水中,装入带有隔膜的瓶中,制备2L。然后对配制完成的溶液进行121°C、40分钟的高压蒸汽灭菌。

    2

    抗生素溶液的溶解(20 g/L)

    2.1  背景

    抗生素的溶解是无菌检测操作中非常关键的操作步骤。未溶解的残留抗生素会被膜过滤器截留,导致培养过程中抑制微生物生长。试验表明使用30°C的生理盐水溶解盐酸万古霉素最为迅速可靠。更为详细的试验描述和试验结果请参考Sterisart® 应用指南No.1。针对下一步骤,我们还专门开发了一种注入和摇匀的方法。生理盐水的预热可通过培养箱或水浴轻松实现

    2.2  样品制备

    取事先准备好一个带有隔膜的500ml瓶(瓶A), 内含10g抗生素混合物。将Sterisart® NF适配器16470的无标识管路插入泵中,然后将16470带有黄色标记的长针头插入瓶B的隔膜中,该瓶内装有500ml已预热至30°C的无菌生理盐水;进而将短针头插入装有抗生素的瓶A的隔膜中。瓶A以一定角度倒置,使

    抗生素冻干粉落到瓶颈处。然后将NaCl溶液以设定值为300的泵速打入装有抗生素的瓶A中。

     

    大约5秒钟后,将瓶A恢复正位,让抗生素和NaCl溶液一起回落到瓶底。流体的泵入压力要足以将粘在玻璃瓶壁上的抗生素冲洗下来。向瓶A注入溶液到500ml刻度,然后摇动瓶子直至抗生素完全溶解。以上操作步骤使用了货号为16470的Sterisart®NF适配器和货号为16413的Sterisart®通用型无菌检测泵,该泵是现有16420无菌检测泵的上一代产品。有关Sterisart® NF 适配器16470使用的详细信息见产品说明书。

    试验方法

    1

    膜过滤

    Sterisart® 系统16466装入泵中后,向系统泵入100ml无菌生理盐水,用于润湿滤膜。然后向Sterisart® 系统中泵入无菌空气以排空溶液。随后,500ml溶解好的抗生素经容器滤过。需特别当心,避免抗生素液体沾到后续无法冲洗到的区域。再次用无菌空气排空装置。随后用5×200ml无菌生理盐水冲洗滤膜,以确保无抗生素残留在膜和塑料部件上,从而不会抑制微生物的生长。有关Sterisart®NF装置的详细使用信息见所附产品说明书。

    2

    注入培养基

    100ml大豆酪蛋白消化培养基注入Sterisart® 系统两个容器中的一个。用夹子将管路夹紧封好,在距夹子约10cm处切断管路。第二个容器用于进一步检测。(见 4.5).

    3

    接种微生物

    盐酸万古霉素适用于多数革兰氏阴性细菌。因此试验使用枯草芽孢杆菌(革兰氏阴性菌)。通过系列稀释方式确保每ml枯草芽孢杆菌溶液中含50-100CFU菌。取1.0ml绿脓杆菌溶液加入胰酪大豆胨液体培养基中。

    4

    培养

    Sterisart® 容器在30 °C条件下培养3天。每天检查微生物的生长情况。

    5

    膜的抑制试验

    Sterisart® 系统第二个容器中的Sartochem®

    膜是用来进行抑制试验的。打开装置,移出膜,将膜分成以下3部分:

    a: 中央膜片

    b: 外部膜片

    c: 支撑片

     

    将三个膜组件分别放到接种有金黄色葡萄球菌的琼脂平皿中,30°C培养24小时。一旦抗生素在膜的特定区域富集,这些区域的细菌生长就会受到抑制。

    6

    结果

    培养24小时后,可观察到轻微浑浊。培3天后,Sterisart® 容器内可明显观察

    到细菌的生长。培养基非?;胱牵ㄉ?/span>

    情况良好)。抑制试验表明在膜的不同

    区域均未有抗生素残留。琼脂平皿上的

    微生物直接在膜边缘生长。它们的生长

    未受到抑制。

    结论

    使用5×200ml生理盐水冲洗即可确??股氐挠行コ?。微生物生长试验结果表明测试所用盐酸万古霉素在Sterisart®系统内没有残留,不存在促进或抑制微生物生长效应。

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